目录RNA为什么不能PCR 将目的基因导入原核细胞的方法 获取目的基因的方法有哪三种 将目的基因导入微生物细胞中 氨基酸进出细胞有哪些方式
目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法。导入的介质可以是质粒,也可以是动物病毒侵染。
显微注射法是利用管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注哪如射如缓斗针,将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中,然后藉由宿主基因组序列可能发生的重组、缺失、复渣磨制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。
目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法。导入的介质可以是质粒知陆,也可以是动物病毒侵染。显微注射法是利用管尖极细(0.1至0.5μm)的玻璃微量注射针,将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中,然后藉由宿主基因组序列可能发生的重组、缺失、复制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内。
扩展资料
显微注射法转基因的方式
直接把重组过的DNA注入受精卵的原核中,也就是将从胚胎提供者的输卵管中取得的受精卵移到倒置显袭枯微镜上的微量注射台上,然后利用固定吸量管固定住,之后注射针则依序穿过zonapellucida,ocytemembrane及malepronuleusmembrane后,将DNA注入,注入时拍猛洞可以见到原核膨大。
以小鼠受精卵雄原核的显微注射为例,显微注射所使用的受精卵固定吸管(holdingpipette)及注射针制备很困难,除影响操作时间外,也是影响转基因效率及基因注入后之胚胎存活及转基因成功与否极其重要的因子。
参考资料来源:-显微注射法
检测目的基因是否导入受体细胞的方法是:导入时用的运载体上如果有抗性基困哗因(标记基因),就可以通过检测抗性基因的表达来检测,比如运载体pbr322
就带有抗四环素基因和抗氨卞青霉素基因羡逗
要么汪派行就等目的基因在受体细胞中表达以后,然后根据特定的性状来区分.
还有dna、mrna、蛋白质杂交法.
合成所最终需要的蛋白质,即最终所需要的产品.
可通过物汪转染的方法将目的基因导入受体细胞;包括化学转染罩猜仔法:1.deae-葡聚糖法,兆嫌2.磷酸钙法,3.人工脂质体和物理方法:①显微注射②电穿孔③基因枪等;此外还可通过辅助载体(如病毒)将目的基因导入到宿主细胞。
常用方法:基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌,枯草杆菌,土壤农杆菌,酵母菌和动植物细胞等。其中,对于细菌或植物细胞,常用质粒作为载体将目的基凳肆返因导入细胞内;动物细胞则用显微注射的方法将目的基因导入动物受精卵的雄性原核中。
过程:用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。例如,如果运载体是质粒,受体细胞是细菌,一般是将细菌用氯化钙处理,以增大细菌细胞壁的通透性,使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。目枣饥的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,雹迟由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。