微生物培养基的配制?1、购买琼脂条或琼脂粉,琼脂粉价格比较昂贵;2、配置肉汤培养基 3、加入琼脂,加入的量为2%,为了省钱,可以加1.5%,就是每100毫升培养基中加入1.5克的琼脂粉或琼脂条 4、放入灭菌锅中进行灭菌。如果不灭菌,需要放在电炉上进行加热,如果配制用的是玻璃容器则加热时需要垫石棉网,那么,微生物培养基的配制?一起来了解一下吧。
1、常用玻璃仪器的准备
制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净,晾干后备用.
(1)平皿用纸或布包好,或装在金属盒内,于121℃高压蒸汽菌3min后烘干,备用.
(2)试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好,再用布或报纸包扎好,121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干,备用.
(3)吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端(防止污染物吸出,或橡皮帽内的气体污染),然后用纸包后或装入金属吸管筒内,于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干,备用.其他玻璃器皿均应按上法处理,也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后,备用.
2、培养基的制备及储存
(1)溶化:一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内.加入蒸馏水,隔水加热以促其溶解,加热时应经常搅拌,防止焦结,待其溶解后补足水分.
在使用干燥培养基时,先将蒸馏水按定量加入容器中,然后称取一定量培养基干粉放入水中,静置10—15min,搅拌,振荡,或延长时间以促进溶解,一般不要热,必要时加热,但时间不宜过长,温度不宜过高,避免某些营养成分被破坏.
(2)校正酸碱度(调节pH):培养基必须有适当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一,测定pH的标准温度为25士2℃.调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时,宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低,一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右,灭菌后基本合适.因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定,并记下每次pH的测定结果,有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性,从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH,用时也必须再验证.测定时,一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化,或用pH计校正,如与所需pH不符,可用以上的酸或碱液加以校正.调整pH后要加热过滤,使培养基澄清.
(3)培养基的分装:大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认.每次使用前后,均要对分配器的管道系统进行冲洗,在分装无菌培养基前,则要采用无菌硅胶管.
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中,高压灭菌后根据需要分装平皿或试管.
平皿:倾注平皿,应在无菌室中放置3—4h,如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min.让水蒸汽自然蒸发.
斜面:制备低层斜面分装于试管,约占容积1/5,灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上,使成斜度,分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基,如沾有培养基应用布抹去,以避免污染.
高层斜面:制备高层斜面分装于试管,约占试管容积的1/3,灭菌后趁热放置成高层短斜面,待其凝固后应用.
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天(2h内最佳)进行灭菌处理.液体、半固体培养基一般在高压灭前分装,约装试管容积的1/3,在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基,灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中.
培养基的灭菌:培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌,各种培养基的灭菌时间和压力,按其成分不同而定.普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min,但容器和装量较大时,应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,连续3d,间歇灭菌.血清或组织液,采用低热56—58水浴1h,连续5—6d灭菌,一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等,可用细菌过滤器,过滤除菌.高压灭菌应严格按照操作规程执行,必须逐渐加热,彻底排除灭菌器内的空气,再逐渐升压保持预定的压力和时间,达到全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确认,如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好.
1、购买琼脂条或琼脂粉,琼脂粉价格比较昂贵;
2、配置肉汤培养基
3、加入琼脂,加入的量为2%,为了省钱,可以加1.5%,就是每100毫升培养基中加入1.5克的琼脂粉或琼脂条
4、放入灭菌锅中进行灭菌。如果不灭菌,需要放在电炉上进行加热,如果配制用的是玻璃容器则加热时需要垫石棉网,以防止加热过程中破裂
5、灭菌完成后,冷却就成固体了。
原理:1.单个微生物过小,一般采取菌落培养法进行培养观察.
2.由于不同的微生物生长环境不同,种群间有明显界限.一个菌落可认为是同一菌种的集合.
仪器:接种铲和接种针(用于陆生菌种) 接种环(用于水生菌种) 酒精灯 培养皿
步骤:1.配置不同浓度的营养液稀释液:取营养液1ml溶于9ml无菌水中,振荡 5min配成10%的溶液.
2.将容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰用吸管从此溶液中吸取1ml加入到装有9ml无菌水的试管中.以此类推制成1%,0.1%,0.01%等不同浓度的稀释液.
3.将试管口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,左手拿试管,右手托培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰).将溶液倒入培养皿中,在各培养皿上标上浓度.
4.将有细菌生长的样品容器口靠近(注意不是对着)酒精灯灯焰,用接种环挑取菌落上的少量菌体加入10%的营养液中.把接种环放在酒精灯上灼烧灭菌,再次取样加入盛1%的营养液的培养皿(仅露一条小缝,且靠近灯焰)中.重复这个操作,将各浓度的营养液接上种.
5.轻轻摇匀接上种的培养皿,置于恒温箱内37摄氏度保存,2~3天后就有菌落出现.
配制培养基的七个过程如下:
1.选择培养基。根据所需培养的微生物种类、生长条件等特性,选择适合的培养基。
2.准备试剂和仪器。制备培养基需要一些试剂和仪器,如称量器、搅拌器、pH计等。
3.称量干粉培养基。称量干粉培养基时为避免污染,可用专用角匙。
4.配制培养基。自行配制的培养基,各营养成分应按要求顺序加入,避免产生沉淀。
5.溶解干粉培养基。称量好的干粉培养基应先溶解再高压灭菌。
6.加棉塞。需要加棉塞的培养基应松紧适当。
7.高压蒸汽灭菌。配制好的培养基一般采用高压蒸汽灭菌。
扩展知识:
培养基是一种人工模拟自然环境,以支持微生物生长、繁殖和分泌所需营养物质的过程。它是生物学和农业领域中研究和应用的重要工具。培养基通常由水、碳源、氮源、生长因子、矿物质、pH调节剂等组成。水是培养基中最重要的成分。
因为它提供了微生物生长所需要的大部分介质。碳源是微生物生长所需要的主要能源来源,它可以是糖、有机酸或其他有机化合物。氮源是微生物生长所必需的营养物质之一,它可以是氨基酸、尿素或其他含氮化合物。生长因子是微生物生长所必需的微量营养物质。
如维生素、辅酶等。
是按照微生物生长的营养需求及其相互比例配制的。牛肉膏和蛋白胨提供微生物生长所需的蛋白质、核酸和维生素、无机盐(微量元素),琼脂只为培养基提供半固体的支撑结构,不提供微生物生长的营养。
有时,也根据所培养的微生物的特殊需要配制培养基,如特别提供某种营养素,或专门缺乏某种营养素,使微生物得以鉴别、分离。
以上就是微生物培养基的配制的全部内容,配制基础培养基:称取上述试剂,加入蒸馏水中,加热溶解并搅拌至均匀。调节pH值:使用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节培养基的pH值至7.4左右。高压蒸汽灭菌:将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌处理,以杀灭其中的微生物。冷却与保存:灭菌后,待培养基冷却至适宜温度,可加入琼脂并均匀搅拌。