微生物的实验室培养?6、接种培养。接种后,也是倒置培养(原因同 5 所说)倒置后还可以防止培养基水分蒸过快发,培养基变干,无机盐析出,营养成分浓度变大,不能使用,不利于微生物的生长。不过,分装后的培养皿应尽快使用,那么,微生物的实验室培养?一起来了解一下吧。
你是倒平板后才灭菌吗?
我坦携们做实验都不是这样的,都是先配制培养基,毕仔比如用三角瓶装,灭菌后在无菌操作台上无菌操作条件下倒平板的,凝固后,才可能倒置放置。
培养时候倒置是为了减少培养基中水分蒸发,因为除了常见的变形菌目的细菌,如革兰氏阴性菌大肠杆菌之类的生长很快以外,不少微生物都需要培养较长时间,一两周到四五周不等让数伏。这时不光要倒置,培养间或培养箱中还要放一些装水的烧杯,补充空间水分,最好能有设备可以实时控制空间湿度。
一)实验目的(1)了解空气中微生物的分布状况。(2)比较普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和种类。(3)验证无菌操作法在微生物学实验中的重要性。
(二)实验原理在我们周围的环境中存在着种类繁多、数量庞大的微生物。空气中也不例外。虽然空气不是微生物栖息的良好环境。但由于气流、灰尘和水沫的流动枝盯,人和动物的活动等原因,仍有相当数量的微生物存在。当空气中个体微小的微生物落到适合于它们生长繁殖的固体培养基的表面时,在适温下培养一段时间后,每一个分散的菌体或孢子就会形成一个个肉眼可见的细胞群体即菌落。观察大小、形态各异的菌落,就可大致鉴别空气个存在的微生物的种类。本实验通过检测普通实验室和消毒后的无菌室空气中存在的微生物,从而判断无菌室的消毒效果,了解空气中常见的微生物类群。
(三)实验器材(1)培养基:1)牛肉膏蛋白胨培养基。2)马铃薯蔗糖培养基。(2)器材:无菌平皿若干套,酒精灯,培养箱等。
(四〕实验方法(1)倒平板:按常法配置上述培养基,分装于三角瓶中,高压灭菌备用。临用前将培养基熔化,冷却至50℃左右,倒平板若干个备用。(2)检测:先将无菌室的紫外灯打开,照射15min后关闭。打开上述冷凝和并了的无菌平板的皿盖,让其在无菌室空间和无人走动的普通实验室空间分别暴露Ih后,盖上皿盖。
大多数细菌均可以通过人工方法培养,而衣原体和病毒的分离培养往往需要活组织、鸡胚、特殊细胞株及动物接种。只有将微生物培养出来才能对它进行研究、鉴定和应用,对于鱼类细菌性疾病的认定很有帮助。
一、接种与分离方法
根据待检标本的性质、培养目的和所用培养基的种类,采用不同的接种方法。
1.平板划线分离培养法
对混有多种细菌的临床标本,采用划线分离和培养,使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离,得到分散的单个菌落,以获得纯种。临床送检的标本如痰、咽试子、泌尿生殖道的分泌物和粪便等细菌检验均需要借助琼脂平板划线分离目的菌。平板划线分离法通常有两种方法:
(1)分区划线分离法:此法常用于含菌量较多的标本如痰、泌尿生殖道的分泌物和粪便或混合细菌的分离。先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区(占培养基总面积的¼)并作数条划线,再于2、3、4区依次划线。每划完一个区域,均将接种环烧灼灭菌1次,冷后再划下一区域,每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。一个成功分区划线的平板,培养后分别观察1区形成菌苔,2区菌落连成线,3区和4区可分离到单个菌落。
(2)连续划线分离法:此法常用于含菌量不多的标本或培养链盯物中的细菌分离培养。
1905年,德国微生物学家科赫因对结核杆菌和结核菌素的研究取得重大成就而荣获诺贝尔奖金。他发明固体培养基,用它分离培养细菌,创造细菌的纯粹培养法。他又改进细菌染色法,为研究细枝氏菌的形态和结构创造有利条件。荷兰科学家E.C.翰逊教授研究使啤酒发酵的酵母,创造单细胞的纯粹培养法。以后,又有人采用纯粹培养法选择适当酵母,用于啤酒的工业生产,为纯粹培养法在工业发酵上的应用开辟了道路。翰逊的学生哈斯发现,当时用的由明胶制成的固体培养基很容易发生液化现象,使用时有困难。哈斯的妻雹搭念子建议用琼脂源困代替明胶,获得了较好的效果。这种琼脂培养基被后人采用,一直沿用到今天。后来又有人创造一种培养皿,可供微生物平板分离用。从此以后,分离出的微生物日益增多,新的微生物不断被发现。这样,可供工业用的微生物也日益充实起来,一支微生物生力军异军突起。
1.平板划线分离培养法
对混有多种细菌,采用划线分离和培养,使原来混杂在一起的细菌沿划线在琼脂平板表面分离,得到分散的单个菌落,以芹指亏丛获得纯种。平板划线分离法通常有两种方法:
①分区划线分离法:此法常用于含菌量较多的细菌的分离。先用接种环挑取标本涂布于琼脂平板1区(占培养基总面积的¼)并作数条划线,再于2、3、4区依次划线。每划完一个区域,均将接种环烧灼灭菌1次,冷后再划下一区域,每一区域的划线均与上一区域的划线交接1~3次。一个成功分区划线的平板,培养后分别观察1区形成菌苔,2区菌落连成线,3区和4区可分离到单个菌落。
②连续划线分离法:此法常用于含菌量不多的标本或培养物中的细菌分离培养。方法是先将接种物在琼脂平板上1/5处轻轻涂抹,然后再用接种环或拭子在平板表面曲线连续划线接种,直至划满琼脂平板表面。
2.琼脂斜面接种法
主要用于菌落的移种,以获得纯种进行鉴定和保存菌种等。用接种环(针)挑取单个菌落或培养物,从培养基斜面底部向上划一条直线,然后再从底部沿直线向上曲折连续划线,直至斜面近顶端处止。生化鉴定培养基斜面接种,用接种针挑取待鉴定细菌的菌落,从斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折划线接种。
以上就是微生物的实验室培养的全部内容,①摇床培养法,即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后,放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡,使空气不断进入培养液中,促其良好生长;②浅盘培养法,又称表面培养法,在盘内放一浅层培养基。