蛋白质的化学修饰？那么，蛋白质的化学修饰？一起来了解一下吧。
前体蛋白没性要进行系列翻译加工才能具功能熟蛋白加工类型种般几种：n-端fmet或met切除、二硫键形、化修饰剪切合蛋白质二0种同氨基酸组合蛋白质蛋白质翻译蛋白质其物化官能团（醋酸盐、磷酸盐、同脂类及碳水化合物）附蛋白质改变蛋白质化性质或造结构改变（建立双硫键）扩阔蛋白质功能 再者酶蛋白质n末端移除氨基酸或间肽链剪举例说胰岛素肽激素建立双硫键剪两并链间移走肽前体形蛋白质包含两条双硫键连接肽链 其修饰像磷酸化控制蛋白质机制部份蛋白质令酶性化或钝
【经PEG修饰后的纳米结构脂质载体的优点】PEG化学修饰是修饰纳米载体最常用的方法。经PEG修饰后的NLC亲水性增强．可阻止RES对NLC的吞噬．从而延长NLC在体内的循环时间，并对体内非RES的特异组织产生靶向作用。
在过去几十年里，难溶性或水不溶性药用活性成分（APIs）制剂的发展一直是制药技术领域所面临最艰巨的挑战之一。随着对难溶性的研究的加深，新的药物传递系统不断出现。固体脂质纳米粒（Solid lipid nanoparticles，SLN）是上个世纪90年代发展起来的一种新型药物纳米载体，它是以天然或合成的室温下固态脂质为载体，这种脂质生理相容性强、毒性低。固体脂质纳米粒能够有效的减少敏感APIs的降解，提高其稳定性。由于其平均粒径小，固体脂质纳米粒还可以提高APIs到达作用部位的传递量。2000年以后在固体脂质纳米较基础上出现了纳米结构脂质载体(Nanostructured lipid carriers，NLC)，被称为第二代脂质纳米粒子。NLC与SLN不同之处在于其内部结构，NLC是以一定比例的液态油或混合脂质代替了固体脂质纳米粒中的固体脂质而制备出的新型固体脂质纳米粒。纳米结构脂质载体解决了固体脂质纳米粒的载药量低、物理稳定性差等缺点，不仅有较高的载药盘和较好的物理稳定性，而且具有与固体脂质纳米粒同样的控制药物释放作用。
【PEG修饰】是指采用PEG修饰剂，又称聚乙二醇修饰剂，修饰性PEG，PEG修饰剂等（是带有官能团的聚乙二醇），对蛋白质药物进行修饰，以增加体内半衰期，降低免疫原性，同时还可以增加药物的水溶性。
摘要 磷酸化修饰是一种重要的蛋白质化学修饰, 对蛋白质功能的完成或改变起到重要作用。该领域的研究存在很多技术难点, 对该领域研究形成了挑战。近年来相关技术有了很多突破, 磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章将从磷酸化蛋白的检出、磷酸化蛋白质和肽段的富集、生物质谱技术的改进以及磷酸化蛋白和多肽的定量与比较几个方面介绍该研究领域的技术进展。 关键词 磷酸化蛋白 磷酸化肽 生物质谱 定量分析 生命活动与蛋白质的动态变化密切相关, 很多情况下某些蛋白质的绝对量并不会发生明显变化, 而是通过各种翻译后修饰来完成或改
摘要 磷酸化修饰是一种重要的蛋白质化学修饰, 对蛋白质功能的完成或改变起到重要作用。该领域的研究存在很多技术难点, 对该领域研究形成了挑战。近年来相关技术有了很多突破, 磷酸化研究也取得了很多新的成就。文章将从磷酸化蛋白的检出、磷酸化蛋白质和肽段的富集、生物质谱技术的改进以及磷酸化蛋白和多肽的定量与比较几个方面介绍该研究领域的技术进展。 关键词 磷酸化蛋白 磷酸化肽 生物质谱 定量分析 生命活动与蛋白质的动态变化密切相关, 很多情况下某些蛋白质的绝对量并不会发生明显变化, 而是通过各种翻译后修饰来完成或改变其功能。在数量众多的蛋白质翻译后修饰中, 磷酸化修饰是非常重要的一种, 现今发现的所有蛋白质中超过30%可被磷酸化修饰。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关, 如DNA损伤修复[1]、转录调节[2]、信号转导[3]、细胞凋亡的调节[4]等。磷酸化蛋白质及多肽的研究可帮助我们阐明上述过程的机理, 进一步认识生命活动的本质。近年来不断出现的许多相关的新技术、新方法推动了该领域研究的进展。 1 磷酸化蛋白的检出 当前针对蛋白的研究绝大多数是基于电泳的, 胶上磷酸化蛋白点的检出是一个重要环节。较早期的研究中最常用的方法是用32P标记的磷酸根通过代谢进入细胞中并被利用, 使得细胞内的磷酸化蛋白带有放射性的32P, 从而可在电泳后被检出[5]。该方法需要接触大量的放射性物质, 并且只能应用于培养的细胞, 所以已经逐渐被淘汰。利用抗磷酸化蛋白的抗体进行Western blot检测, 具有特异性好、分辨率高的优点, 至今还是常用的手段[6], 但由于分析和制备不能用同一块胶, 有时检出的蛋白点与胶上的蛋白点很难对应, 使分析变得困难。Schulenberg 等[7]在2003年报道了一种小分子的荧光染料Pro-Q Diamond dye, 可对磷酸化蛋白质特异性染色, 该方法方便、快捷且具有较高的灵敏性, 兼容质谱鉴定, 随后还可再进行其它方法的染色。Martin 等[8]将一些蛋白质和肽段列阵在几种商业化的衬底上, 然后利用Pro-Q Diamond dye检验芯片上的蛋白质及多肽的磷酸化水平, 灵敏度可达到312-625fg, 这种芯片与高灵敏度检出方法的结合提供了一个强有力的研究信号通路及磷酸酶抑制物的平台。荧光双向差异凝胶电泳(Fluorescent two dimensional difference gel electrophoresis, 2D-DIGE)是近几年出现的一种基于双向电泳的荧光标记蛋白质差异比较的技术, 具有非常好的检出灵敏度, 并且由于所要比较的目的蛋白始终在相同的条件进行一向、二向电泳并展示在同一张胶上, 从而减少了实验误差引起的差异, 该技术已经成为比较蛋白质组研究的有力工具。磷酸化蛋白质只是某个蛋白质组中的一小部分, DIGE技术不能对其特异性标记, 所以利用DIGE技术对磷酸化蛋白的比较分析是困难的。Seisuke 等[9]很好的解决了这一问题, 他们在实验中利用磷酸化蛋白富集试剂盒富集磷酸化蛋白后, 利用DIGE技术进行差异分析, 扩展了DIGE技术的应用范围。 2 磷酸化蛋白质、肽段的富集 由于磷酸化肽段相对于非磷酸化肽段来说是非常少的, 在质谱鉴定时易被其它肽段掩盖, 所以常常需要对磷酸化蛋白质或肽段富集后再进行鉴定。用于富集磷酸化蛋白质、肽段的经典方法有金属离子亲和层析(IMAC)[10]、生物素―亲和素富集[11]、免疫沉淀[12]和磷酸化抗体亲和层析[13]等方法。上述方法大多是基于层析技术, 而层析柱填料的性质则是影响富集效果的关键因素。2004年, Pinkse等[14]利用TiO2填料自制层析柱, 将自磷酸化蛋白PKG酶切产物用此柱分离后进行在线ESI-MS/MS分析, 鉴定出PKG至少有8个磷酸化位点, 并发现Ser-26 和 Ser-44两个新的磷酸化位点。Pinkse等认为TiO2填料可与磷酸化肽段高效、特异的结合, 从而有效富集磷酸化肽段, 应用前景很好。利用反相柱脱盐、浓缩肽段之后进行质谱鉴定是比较常用的肽段鉴定方法, 但对于亲水肽段, 比如磷酸化后变为亲水的磷酸化肽段鉴定效果不好。Larsen等[15]比较反相树脂与石墨填料柱对磷酸化肽段的分离效果, 认为后者可有效的滞留磷酸化肽段, 更适合磷酸化肽段的富集、分离和鉴定。对于磷酸化肽段的富集, 一些学者并没有将目光仅仅局限在亲和填料的改进上, Steven等[16]发现在pH2.7左右大部分胰蛋白酶酶切肽段带有两个正电荷, 而肽段上有一个磷酸化修饰时则带有一个正电荷, 根据这一现象, 可利用强阳离子交换色谱将带有一个正电荷的磷酸化肽段富集。Steven等利用这一方法在Hela细胞核中鉴定出967个蛋白中的2 002个磷酸化位点, 得到了现今为止最大的磷酸化蛋白谱。 3 利用生物质谱确认磷酸化位点 利用一级质谱结合串联质谱可确定磷酸化位点。例如通过MALDI-TOF/TOF一级质谱可发现与肽段分子量理论值相差80 Da (HPO3=80 Da) 的质谱峰, 该峰的二级质谱图中如果母离子与旁边的最高强度的质谱峰相差98 Da (中性丢失H3PO4=98 Da), 则可确定该肽段为磷酸化肽段(图1), 进一步通过二级或多级质谱的谱图确认具体的磷酸化位点。此外, 利用β－消除反应使丝氨酸、苏氨酸磷酸化残基转化为氨乙基丙氨酸, 后者为赖氨酸的同形物, 此位点可被胰蛋白酶和Lys-C 肽链内切酶等酶特异性识别、酶切, 通过质谱即可很容易地判断磷酸化位点。所以磷酸化位点的确认有赖于简化的质谱谱图和串联质谱的应用以及质谱检测灵敏度的提高。近年来生物质谱技术的发展为蛋白质磷酸化位点的检测提供了更多可选择的仪器和方法。 3.1 傅立叶变换回旋共振质谱(Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry, FT-ICR MS) T-ICR MS是目前为止准确度最高的质谱, 可 得到1~2 ppm或更好的分辨率, 这样的高分辨率使其适合于磷酸化位点的分析。离子捕获解离(electroncapture dissociation, ECD)是应用于FT-ICR MS的一种技术, 是传统的串联质谱的补充。可以轻松打开二硫键, 而易断的翻译后修饰的共价键却可以在ECD破碎肽链时保存下来, 使得这一方法适合用于翻译后修饰的研究。 图1 利用MALDI-TOF/TOF谱图鉴定磷酸化肽段 a: 酶切产物的一级质谱图。磷酸化肽段的质谱峰用星号标出, 其相对未磷酸化肽段的理论分子量位移80 Da (HPO3 = 80 Da); b: a中标记星号的质谱峰的二级质谱分析。在图中可见比母离子小98 Da (H3PO4 = 98 Da)的中性缺失峰
具体http://www.intlpeptide.com/qwtz/show-133.html
特征 N-连接O-连接
合成部位 粗面内质网主要在高尔基体
合成方式来自同一个寡糖前体 一个个单糖加上去
与之结合的氨基酸残基天冬酰氨丝氨酸、苏氨酸、羟脯、羟赖
最终长度 至少5个糖残基1-4个糖残基
第一个糖残基 N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰半乳糖胺
大概清楚了吧！ 蛋白质糖基化是一种蛋白质修饰，作用嘛。可能有两点：1为蛋白质打上标志，便于转移。2影响多肽的构象，增强蛋白质的稳定性（或者其他作用）。 一般是这样的：N连接糖基化发生在糙面内质网中； O连接糖基化发生在高尔基体中。 当然，细胞质基质中的糖基化也有，如哺乳动物细胞中把N-乙酰葡糖胺分子加到蛋白质丝氨酸残基的羟基上。进化上的意义：寡糖链具有一定的刚性，从而限制了其它大分子接近细胞表面的膜蛋白，这就可能使真核细胞的祖先具有一个保护性的外被（像一个软甲）同时又不象 细胞壁 那样限制细胞的形状与运动。
1、α—氨基酸脱水缩合形成肽链
2、肽链沿一定方向盘绕和折叠
3、再借助各种次级键卷曲折叠成特定的球状分子结构
4、（视蛋白质种类而定,不一定有这一步）多个具有三级结构的多肽链,以适当的方式聚合,形成蛋白质.
以上就是蛋白质的化学修饰的全部内容，助。
